飛行質譜
百力格生物可以根據客戶需求定制化合成飛行質譜引物,基于時間飛行質譜(MALDI-TOF)完成的單核苷酸多態性檢測(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP檢測)準確率可達99.9%,準確性高、靈活性強、通量大、檢測周期短、性價比高。
優勢
1.特殊的合成純化工藝,引物純度≥95%;
2.嚴格控制N-1片段比例,避免檢測過程中出現假陽性;
3.專有的脫鹽工藝,最小化引物中鹽雜質殘留,避免質譜結果中引入鹽峰,干擾判讀;
4.精準定量,誤差≤±10%,避免多重PCR過程中產生非特異性擴增。
原理
通過PCR擴增出含有SNP位點的一段DNA(SNP位點前后各50bp左右),然后用SAP酶去除PCR體系中剩余的脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)和引物,加入單堿基延伸引物,其3’末端堿基緊挨SNP位點,采用四種ddNTP替代dNTP。這樣,探針在SNP位點處僅延伸一個堿基,連接上的ddNTP與SNP位點的等位基因對應。用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS) 檢測延伸產物與未延伸引物間的分子量差異,確定該點處堿基。
實驗流程
1. PCR擴增含有目的SNP的DNA序列,并通過純化去除未結合的dNTPs;
2. iPLEX單堿基延伸:純化后的PCR產物,針對每個靶點SNP設計一條延伸引物,在以ddNTPs為底物的體系中進行單堿基延伸,每個SNP的等位基因延伸產物僅為末端一個堿基的差異;
3. 質譜檢測:純化,并將產物轉移到SpectroCHIP芯片上,進行質譜檢測,同一個SNP的等位基因由于分子量不同,形成不同的檢測峰而被區分。